贴壁细胞培养中的细胞不贴壁（或不附着）是一个常见问题，可能由多种因素导致。以下是对细胞不贴壁原因的详细归纳：
培养环境因素
01. pH值不适宜
分析：大多数细胞生长的理想pH范围在7.2到7.4之间。pH值过碱可能影响细胞贴壁。此时可以放入CO2培养箱，以维持适宜的pH环境。
02. 营养成分不足
分析：培养基中的营养成分不足，或是营养成分的比例不适当，可能会导致细胞无法正常生长和附着。此时，可以尝试改变培养液成分，使用含有促贴壁因子的培养基。
03. 培养液的问题
分析：配制错误、过期储存以及储存不当，这些因素都可能导致细胞不贴壁，面对这种情况，一个及时且有效的应对措施是更换培养液。
04. 胰酶消化液
分析：使用含EDTA的胰酶消化液，消化细胞后如果不离心去掉EDTA，细胞贴壁需要的Ca+离子被鳌合，导致细胞不贴壁，解决办法是带EDTA的胰酶消化液一定要离心。
05. 细胞消化过度
分析：在胰酶消化液中消化时间过长，细胞膜蛋白酶解后，影响细胞信号传导和功能，导致不贴壁。
06. 一次性培养耗材
分析：对于一次性培养耗材未经过细胞培养特别处理，也会导致细胞不贴壁。
细胞自身因素
01. 细胞老化
分析：细胞传代次数过多，可能会导致细胞老化，失去贴附性。此时，可以尝试复苏新的细胞，并使用20%血清帮助细胞复原，同时注意传代接种的细胞密度和时机。
02. 细胞状态不佳
分析：如细胞在传代过程中受损，或是在冻存和复苏过程中受到影响，可能导致细胞活力下降，无法正常附着。
03. 接种细胞起始浓度不当
分析：细胞接种浓度过低或过高，可能无法形成有效的细胞外基质，影响贴壁。此时，应调节最佳接种细胞浓度。
培养容器与操作因素
01. 培养容器问题
分析：若玻璃培养瓶瓶底不干净，应注意刷洗，或换用一次性TC处理的塑料培养瓶。
02. 支原体污染
分析：支原体感染或其他微生物污染会导致细胞功能紊乱，影响贴壁能力。此时，应分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
综上所述，细胞不贴壁的原因可能涉及多个方面，包括培养环境因素、细胞自身因素以及培养容器与操作因素等。在解决细胞不贴壁问题时，需要综合考虑以上因素，并通过调整培养条件、改进操作技术、选择合适的培养容器和表面处理方法等手段来优化。
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