胎牛血清解冻有絮状物怎么办?
什么是胎牛血清?
采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段,血中含有丰富的生长发育因子,非常适合各种细胞的培养。一旦胚胎发育完全,这些因子自动消失。因此,8个月胎龄以上的牛胚胎,已接近足月,不能作为胎牛血清的原料来使用。
5-8月龄胎牛
穿刺采血
自然凝固
三道100nm过滤
质量检验
分级制度
全程冷链
胎牛血清的使用要点
正确储存:胎牛血清应在-20°C长期保存,如在4°C保存,不应超过1个月。在使用时注意分装使用,避免反复冻融;
正确解冻:可在4°C冰箱过夜解冻。推荐使用血清融化三步法:即将500ml血清在室温下放置1.5h,20°C水浴25min,37°C水浴35min;
正确使用:配制完全培养尽可能“现用现配”,并于一周内用完。避免胎牛血清在37°C静置过久。
你的胎牛血清解冻后会出现沉淀物吗?
有沉淀物还能用吗?
要不要去掉?如何去掉?
解冻后为何出现沉淀?
胎牛血清作为生命科学实验的必备品,科研人基本都会接触到,细心观察会发现,胎牛血清经常在解冻后出现絮状沉淀物,这是为何?可能有以下几个原因:
1、少量脂蛋白变性沉淀;
2、残留的少量血纤维蛋白(参与凝血过程的蛋白之一);
3、血清融解时,冰块和蛋白融化的速度不一样,局部可能因蛋白浓度过高而产生沉淀;
4、整体变质。
血清出现沉淀物还能用吗?
以上除了第4点以外,均为正常现象,血清可以正常使用。如何判断是不是整体变质了呢?首先是絮状沉淀物为少许而非大量,其次是絮状沉淀除外的血清呈现澄清透明淡黄色,而不是混浊。
而对于第1、2点,属于血清本身产品特点、工艺水平等固定因素,基本改变不了;因此,我们能对血清的沉淀物进行有效控制的,往往是基于第3点,也就是说,在融解血清的过程中,应避免温度降得过快导致融解速度过快,并且减少反复冻融次数。
如何有效减少胎牛血清沉淀物形成?
实际操作中,要使用血清时,我们会采用逐步解冻法:将整瓶血清从-20℃放到4℃冰箱过夜融解,随时查看便进行摇匀操作,待到血清完全融解后,在4℃冰箱里再次摇匀血清,继续放置2-3小时,然后再拿出来进行使用或无菌分装、冻存。
避免将血清直接从-20℃拿到室温融解,或者有部分人着急使用甚至把血清放到37℃水浴融解(这种操作只能少量体积,单次着急使用时采用,应尽量避免)。
步骤:-20℃→4℃过夜→随时摇匀待到完全融解摇匀后继续4℃2~3h→使用/分装冻存。
要不要去除这些沉淀物?
可以不用特意去除,将血清放置一会,待絮状物沉淀到底部后,使用的时候轻拿轻放轻倒,不特意将沉淀物加到试剂里即可。若有少许进入不影响实验,但有时候会影响视野/细胞接触抑制。
非要去除的话,如何去除?
不要使用滤头过滤絮状物,容易堵住滤头,可以在400-500(xg)离心力下,离心2分钟左右,取上清弃沉淀。必要时不含絮状物的上清液可以用滤头过滤除菌便不会堵住滤头了。
初次开封胎牛血清如何正确化冻?
胎牛血清常规储存温度为-20℃,如果需要更加长期的保存,可以-80℃保存。
解冻的时候不建议直接放在常温中(25-37℃)解冻,很容易产生絮状沉淀,进而有可能影响血清品质。
建议的方式为先由-20℃/-80℃转移到4℃解冻,直至解冻全部为液体后,再由4℃转移到室温。在解冻的过程中,需要随时晃动,使血清内成分和温度混合均匀,有助于减少沉淀的产生。解冻后,就可以把血清用15 mL或者50 mL无菌离心管分装冻存啦,可以根据自己使用血清的频率,在4℃存放一管已化冻分装的血清,方便经常配制培养基。在4℃也不可以存放太久,最好在一个月内用完。解冻后的胎牛血清不可以在37℃或者室温存放太久,避免血清中重要的细胞生长因子失活而影响细胞状态。
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